DAX-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419053

Panoramica

Nr0b1 codifica DAX-1 (NR0B1), un recettore nucleare orfano atipico che agisce principalmente come coregolatore trascrizionale nei tessuti steroidogenici e riproduttivi. DAX-1 modula le reti di segnalazione dei recettori nucleari reprimendo o regolando finemente i programmi trascrizionali controllati da fattori come SF-1/NR5A1, influenzando così la biosintesi degli ormoni steroidei, lo sviluppo surrenalico e la regolazione dell’asse ipotalamo–ipofisi–gonadi. Nei modelli murini, un’alterazione dell’attività di DAX-1 influisce sulla differenziazione gonadica, sulla gametogenesi e sull’omeostasi endocrina, rendendo Nr0b1 un nodo rilevante per lo studio della regolazione genica dello sviluppo e del controllo delle vie steroidogeniche. La disregolazione degli ortologhi di NR0B1 è stata associata a fenotipi congeniti surrenalici e riproduttivi, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sullo sviluppo endocrino e sui percorsi di determinazione del sesso.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DAX-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nr0b1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nr0b1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nr0b1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DAX-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nr0b1 per lo studio della segnalazione di DAX-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nr0b1 critici per la funzione di DAX-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nr0b1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DAX-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DAX-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nr0b1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DAX-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DAX-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nr0b1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nr0b1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.