DARPP-32 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422380

Panoramica

Ppp1r1b codifica DARPP-32 (fosfoproteina regolata da dopamina e cAMP, 32 kDa), un integratore chiave della segnalazione dopaminergica e glutamatergica nei neuroni spinosi medi dello striato. Attraverso un meccanismo di “switch” dipendente dalla fosforilazione, DARPP-32 modula l’attività della protein fosfatasi-1 e collega la segnalazione cAMP/PKA alla regolazione a valle della plasticità sinaptica, della funzione dei canali ionici e della segnalazione dei recettori dei neurotrasmettitori. Questo nodo interseca vie che governano l’apprendimento della ricompensa, il controllo motorio e le risposte trascrizionali ai neuromodulatori, rendendo Ppp1r1b un readout comune negli studi sui circuiti dei gangli della base. Alterazioni della segnalazione di DARPP-32 sono state associate a meccanismi di malattie neuropsichiatriche e neurodegenerative, inclusi segnalazione dopaminergica disregolata, plasticità maladattativa e fenotipi comportamentali legati allo stress in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DARPP-32 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp1r1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp1r1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp1r1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DARPP-32.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp1r1b per lo studio della segnalazione di DARPP-32, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppp1r1b critici per la funzione di DARPP-32
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp1r1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DARPP-32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DARPP-32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp1r1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DARPP-32 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DARPP-32 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp1r1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp1r1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.