Plásmido CRISPR de Activación (h) DAP12: sc-400916-ACT

TYROBP codifica la proteína activadora de DNAX 12 (DAP12), un adaptador transmembrana con un motivo ITAM que acopla receptores activadores en células mieloides y linfoides a la señalización downstream. DAP12 se asocia con receptores como TREM2, SIRPβ1 y ciertos receptores de células NK para promover la fosforilación de SYK/ZAP70 y activar las vías PI3K, MAPK y NF-κB, que regulan la fagocitosis, la producción de citocinas, el estallido oxidativo y la supervivencia celular. En microglía y macrófagos, la señalización dependiente de TYROBP modela la activación de la inmunidad innata, el manejo de lípidos y la eliminación de desechos celulares, vinculándola con procesos neuroinflamatorios y desregulación inmunitaria. Las alteraciones en la señalización de TYROBP/DAP12 se han asociado con fenotipos inflamatorios y relacionados con la neurodegeneración, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudiar redes de señalización receptor-adaptador en células inmunitarias humanas.

DAP12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TYROBP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DAP12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TYROBP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TYROBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DAP12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TYROBP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DAP12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DAP12 en células tumorales con expresión de TYROBP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.