Plásmido Doble Nickase (h) DACH1: sc-404712-NIC

DACH1 (factor de transcripción 1 de la familia dachshund) es un regulador transcripcional nuclear de unión al ADN que modula decisiones sobre el destino celular durante el desarrollo y mantiene programas de diferenciación específicos de tejido en células adultas. Influye en redes de expresión génica vinculadas al control del ciclo celular, el equilibrio epitelio–mesénquima y la especificación de linaje mediante interacciones con cofactores y complejos reguladores de la cromatina. La actividad de DACH1 se ha relacionado con vías que gobiernan la proliferación y la migración, incluido el diálogo cruzado con la señalización de receptores hormonales y programas transcripcionales sensibles a factores de crecimiento. Se ha informado de una expresión alterada de DACH1 o de cambios en su contexto regulatorio en múltiples tipos de tumores, y también es relevante para estudios de organogénesis y fenotipos congénitos de patrones de desarrollo.

DACH1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DACH1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DACH1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DACH1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DACH1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.