Plásmido Doble Nickase (h) D2DR/Dopamine D2 Receptor: sc-400235-NIC

DRD2 codifica el receptor dopaminérgico D2 (D2DR), un receptor acoplado a proteína G (GPCR) de tipo Gi/o que modula la neurotransmisión al inhibir la adenilil ciclasa, reducir el AMPc intracelular y regular la actividad de los canales iónicos. La señalización de D2DR se integra con vías canónicas de los GPCR, incluidas PKA/CREB y MAPK/ERK, dando forma a la plasticidad sináptica, la excitabilidad neuronal y la dinámica de los circuitos relacionados con la recompensa. En el sistema nervioso central, D2DR contribuye al control presináptico, como autorreceptor, de la liberación de dopamina y a la regulación postsináptica de la salida estriatal. La expresión o señalización desregulada de DRD2 se ha implicado en fenotipos neuropsiquiátricos y conductas dependientes de la dopamina, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la señalización de receptores y la función de los circuitos neurales.

D2DR/Dopamine D2 Receptor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DRD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DRD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DRD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DRD2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.