Plásmido CRISPR de Activación (h) D1DR/Dopamine Receptor D1: sc-400532-ACT

DRD1 codifica el receptor de dopamina D1 (D1DR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gαs/olf para estimular la adenilil ciclasa, aumentar el cAMP intracelular y activar cascadas de señalización dependientes de PKA. En las neuronas, la señalización de D1DR modula la excitabilidad de la membrana, la plasticidad sináptica y los programas de expresión génica mediante efectores aguas abajo como CREB y DARPP-32, integrando el tono dopaminérgico con la función a nivel de circuitos. DRD1 participa en vías mediadas por dopamina que moldean la recompensa, la motivación y el control motor, y los cambios en la expresión del receptor o en la dinámica de su señalización se investigan con frecuencia en contextos de investigación sobre trastornos neuropsiquiátricos y del movimiento. Como receptor de membrana con expresión estrechamente regulada, DRD1 es un objetivo útil para estudiar la desensibilización de los GPCR, el tráfico del receptor y la comunicación cruzada con otros sistemas neuromoduladores.

D1DR/Dopamine Receptor D1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DRD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

D1DR/Dopamine Receptor D1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DRD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DRD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de D1DR/Dopamine Receptor D1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DRD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de D1DR/Dopamine Receptor D1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía D1DR/Dopamine Receptor D1 en células tumorales con expresión de DRD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.