Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cytokeratin 8 Double Nickase Plasmid (h): sc-418254-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cytokeratin 8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cytokeratin 8 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cytokeratin 8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KRT8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cytokeratin 8: sc-8020
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cytokeratin 8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418254-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418254-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT8 kodiert für Zytokeratin 8, ein intermediäres Filamentprotein vom Typ II, das vor allem mit KRT18 heteropolymerisiert und so in einfachen Epithelzellen ein zentrales zytoskelettales Netzwerk bildet. Zytokeratin 8 unterstützt die Zellarchitektur, mechanische Belastbarkeit und die Positionierung von Organellen und ist an Prozessen wie Zellpolarität, Mitoseprogression, Apoptose-Signalgebung und Stressantworten beteiligt, unter anderem über eine phosphorylierungsabhängige Umgestaltung der Filamente. Eine veränderte KRT8-Expression oder Filamentorganisation wurde mit Defekten der epithelialen Integrität in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Biologie epithelialer Tumoren, Invasion und metastaseassoziierter Phänotypen untersucht. Als häufig verwendeter Epithelmarker trägt Zytokeratin 8 zudem dazu bei, den Zelllinienstatus und Differenzierungsprogramme in Modellsystemen der Entwicklung und Gewebehomöostase zu definieren.
Cytokeratin 8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KRT8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KRT8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KRT8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KRT8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.