Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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Cytokeratin 18 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400305
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Cytokeratin 18 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Cytokeratin 18, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Cytokeratin 18 Anticorpo (RGE53): sc-32329
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Cytokeratin 18 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400305 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O KRT18 codifica a citoqueratina 18, uma proteína de filamento intermediário do tipo I que heteropolimeriza com a queratina 8 para formar o núcleo da rede citoesquelética de células epiteliais simples. Esse sistema de filamentos sustenta a arquitetura celular e a resistência mecânica, além de interagir com complexos juncionais, o posicionamento de organelas e a sinalização de resposta ao estresse que coordena a progressão do ciclo celular e a apoptose. A dinâmica da citoqueratina 18 é regulada por fosforilação e processamento proteolítico, conectando-a à remodelação do citoesqueleto durante a mitose e o estresse celular. A expressão desregulada de KRT18 ou a organização anormal dos filamentos é frequentemente utilizada como marcador do estado epitelial e tem sido estudada em contextos de lesão epitelial, inflamação e biologia de células tumorais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 18 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KRT18 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KRT18, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KRT18 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Cytokeratin 18.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KRT18 para a investigação da sinalização de Cytokeratin 18, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KRT18 críticos para a função Cytokeratin 18
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KRT18 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Cytokeratin 18 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Cytokeratin 18 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KRT18. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Cytokeratin 18 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Cytokeratin 18 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KRT18 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KRT18 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.