Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
cytochrome c1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426027
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- cytochrome c1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico cytochrome c1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cytochrome c1 Anticuerpo (A-5): sc-514435
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
cytochrome c1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-426027 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Cyc1 de ratón codifica el citocromo c1, una subunidad esencial del complejo III mitocondrial (ubiquinol–citocromo c reductasa) que media la transferencia de electrones desde el ubiquinol al citocromo c dentro de la membrana mitocondrial interna. A través de su papel en el ciclo Q, el citocromo c1 contribuye a la generación de la fuerza protón-motriz que impulsa la síntesis de ATP y sostiene la homeostasis redox. La alteración de componentes del complejo III puede perjudicar la fosforilación oxidativa, elevar las especies reactivas de oxígeno y desencadenar efectos secundarios sobre la señalización de la apoptosis y las vías de control de calidad mitocondrial, como la mitofagia. Por ello, Cyc1 se estudia ampliamente en modelos de disfunción mitocondrial y estrés metabólico que se relacionan con mecanismos de enfermedades neuromusculares y neurodegenerativas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO cytochrome c1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cyc1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cyc1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cyc1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cytochrome c1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cyc1 para la investigación de la señalización de cytochrome c1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cyc1 críticos para la función de cytochrome c1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cyc1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido cytochrome c1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido cytochrome c1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cyc1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cytochrome c1 (m) y el plásmido HDR cytochrome c1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cyc1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cyc1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.