Plásmido Doble Nickase (h) cytochrome b5: sc-405811-NIC

El gen humano **CYB5A** codifica el citocromo b5, una hemoproteína anclada a membrana que transfiere electrones desde la NADH–citocromo b5 reductasa a múltiples enzimas oxidativas en el retículo endoplásmico y en la membrana externa mitocondrial. Sustenta vías clave del metabolismo lipídico, como la desaturación y elongación de ácidos grasos, la biosíntesis de colesterol y esteroides, y la oxidación de xenobióticos mediante la modulación de los ciclos catalíticos del citocromo P450. Al influir en el equilibrio redox y el flujo metabólico, **CYB5A** contribuye a la homeostasis celular en hepatocitos y tejidos esteroidogénicos, donde el metabolismo oxidativo es elevado. La alteración de la transferencia de electrones dependiente de **CYB5A** se ha relacionado con cambios en el metabolismo de fármacos y defectos en la esteroidogénesis, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la desregulación metabólica y la señalización sensible al estado redox.

cytochrome b5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYB5A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYB5A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYB5A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYB5A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.