CYTIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432749

Descripción general

Cytip (proteína interactuante con citoesina 1) codifica CYTIP, un adaptador que regula la señalización de citoesina/ARF GTPasa y ayuda a coordinar la adhesión dependiente de integrinas y la remodelación del citoesqueleto. En células inmunitarias, CYTIP contribuye a la señalización de adentro hacia afuera (inside-out) que ajusta las interacciones LFA-1/ICAM, influyendo en la motilidad de los leucocitos, la estabilidad de la sinapsis inmunológica y la dinámica de los contactos célula–célula. A través de estas funciones, Cytip se vincula con vías que gobiernan la activación, la migración y la infiltración tisular de los linfocitos, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria y de fenotipos asociados a la inflamación. Por ello, la perturbación de Cytip en ratón es útil para dilucidar cómo la señalización de adhesión se integra con programas posteriores de polarización y tráfico, tanto in vivo como en modelos inmunitarios en cultivo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CYTIP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cytip en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cytip junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cytip tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CYTIP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cytip para la investigación de la señalización de CYTIP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cytip críticos para la función de CYTIP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cytip para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CYTIP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CYTIP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cytip. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CYTIP (m) y el plásmido HDR CYTIP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cytip para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cytip definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.