Cystinosin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429900

Übersicht

Ctns kodiert Cystinosin, einen lysosomalen, H\+-getriebenen Cystintransporter, der den Cystinexport aus dem Lysosomenlumen ins Zytosol vermittelt und so lysosomalen Transport mit dem zellulären Redoxgleichgewicht und der Aminosäurehomöostase verknüpft. Der Verlust der Cystinosin-Aktivität stört die Lysosomenfunktion, fördert die Anreicherung von Cystin und verändert Signalwege, die an der Autophagie‑Lysosomen-Dynamik, an oxidativen Stressantworten und an metabolischer Anpassung beteiligt sind. In Mausmodellen wird eine Störung von Ctns häufig eingesetzt, um Mechanismen zugrunde liegender Cystinspeicher-Phänotypen zu untersuchen und zu prüfen, wie Defekte im lysosomalen Transport die zelluläre Stresssignalgebung umformen. Diese Prozesse sind relevant für das Verständnis, wie lysosomenzentrierte Transport- und Abbaunetzwerke die Gewebehomöostase in Nieren‑, Augen‑ und immunrelevanten Zelltypen beeinflussen.

Das Cystinosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ctns-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ctns-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ctns nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cystinosin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ctns-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cystinosin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ctns-Exone abzielen, die für die Cystinosin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ctns-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cystinosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Cystinosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ctns-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cystinosin HDR-Plasmid (m) und Cystinosin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ctns-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ctns-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.