cystatin SA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406907

Descripción general

CST2 codifica la cistatina SA, un inhibidor secretado de proteasas de cisteína que restringe a las catepsinas tipo papaína y la actividad proteolítica relacionada en las superficies mucosas. Al modular el equilibrio proteasa–antiproteasa, la cistatina SA ayuda a regular el recambio de la matriz extracelular, el procesamiento de péptidos y la señalización inflamatoria en el microambiente oral y de las vías aerodigestivas superiores. La expresión alterada de cistatinas salivales se ha asociado con cambios en la defensa innata, las interacciones con el microbioma y la remodelación tisular vinculada a la proteólisis, observadas en diversas afecciones inflamatorias y fenotipos adyacentes al cáncer. Por lo tanto, CST2 es relevante para el estudio de vías impulsadas por proteasas que afectan la función de barrera epitelial y la composición del secretoma.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cystatin SA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CST2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CST2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CST2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cystatin SA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CST2 para la investigación de la señalización de cystatin SA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CST2 críticos para la función de cystatin SA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CST2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cystatin SA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cystatin SA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CST2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cystatin SA (h) y el plásmido HDR cystatin SA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CST2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CST2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.