Plásmido Doble Nickase (h) CyPA: sc-418155-NIC

PPIA codifica la ciclofilina A (CyPA), una peptidil‑prolil cis–trans isomerasa ubicua que acelera el plegamiento de proteínas y los cambios conformacionales en el citosol y el núcleo. CyPA modula la proteostasis y la señalización sensible al estrés, incluidas vías asociadas a chaperonas y la regulación de la actividad de quinasas y factores de transcripción que influyen en la apoptosis, la inflamación y la progresión del ciclo celular. Mediante interacciones con socios como CD147/BSG y diversas proteínas cliente, CyPA puede moldear el tráfico de leucocitos y las respuestas al estrés oxidativo, vinculándola con procesos cardiovasculares, neuroinflamatorios y asociados a tumores. Se han descrito alteraciones en la expresión de PPIA o en la actividad de CyPA en múltiples contextos de enfermedad, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de señalización, homeostasis proteica e interacciones huésped–patógeno.

CyPA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPIA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPIA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPIA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPIA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.