CyPA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418155-ACT

Humanes PPIA kodiert Cyclophilin A (CyPA), eine ubiquitär vorkommende Peptidyl‑Prolyl‑cis‑trans‑Isomerase, die die Proteinfaltung sowie konformationelle Umschaltungen im Zytosol und Zellkern beschleunigt. CyPA ist an der Proteostase, an Chaperon-Netzwerken und an stressresponsiver Signalübertragung beteiligt; seine Interaktion mit Zielproteinen kann Transkriptionsprogramme, Apoptose und Entzündungsreaktionen beeinflussen. Die PPIA/CyPA‑Achse wird mit der Modulation von Immunsignalen und Wirt‑Pathogen‑Interaktionen in Verbindung gebracht, und veränderte Expression oder Aktivität wird häufig in der Krebsbiologie, bei kardiovaskulären Entzündungen und in neuroinflammatorischen Kontexten untersucht. Als zelluläres Hub‑Protein wird CyPA häufig genutzt, um Signalwege zu untersuchen, die Proteintransport, Redox‑ und Stressanpassung sowie den Aufbau von Signalkomplexen steuern.

CyPA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PPIA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CyPA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PPIA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PPIA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CyPA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PPIA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CyPA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CyPA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PPIA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.