Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP51A1 (m): sc-419931

Présentation

Le gène murin **Cyp51** code l’enzyme cytochrome P450 **CYP51A1** (14α‑déméthylase du lanostérol), une monooxygénase conservée qui catalyse une étape clé de la voie de biosynthèse du mévalonate/des stérols en aval du squalène, conduisant au cholestérol et à d’autres stérols. En contrôlant le flux des intermédiaires stéroliques, CYP51A1 influence la composition des membranes, la signalisation dépendante des radeaux lipidiques, ainsi que la disponibilité de métabolites dérivés des stérols qui modulent l’homéostasie cellulaire. Les perturbations de la biosynthèse des stérols sont associées à des modifications de la prolifération, de la différenciation et des réponses au stress, faisant de **Cyp51** un nœud d’intérêt pour étudier la reprogrammation métabolique et les besoins lipidiques propres aux organes. Dans des modèles murins, la manipulation de **Cyp51** permet d’explorer de façon mécanistique la régulation de la voie du cholestérol et sa contribution à des phénotypes développementaux et métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP51A1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cyp51 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cyp51, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cyp51 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP51A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cyp51 pour l'étude de la signalisation de CYP51A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cyp51 essentiels à la fonction de CYP51A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cyp51 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP51A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CYP51A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cyp51. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP51A1 plasmide HDR (m) et le CYP51A1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cyp51 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cyp51 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.