Particules Lentivirales d'Activation (m) CYP4X1: sc-429886-LAC

Cyp4x1 code l’enzyme cytochrome P450 CYP4X1, une monooxygénase associée aux membranes impliquée dans le métabolisme des acides gras et des eicosanoïdes, notamment l’oxydation de lipides dérivés de l’acide arachidonique pouvant moduler la signalisation inflammatoire ainsi que l’homéostasie vasculaire ou neuronale. En tant que composante de la voie oxydative plus large des P450, l’activité de CYP4X1 influence l’équilibre rédox cellulaire et la disponibilité des médiateurs lipidiques, l’associant à des processus tels que les réponses au stress oxydatif et la communication intercellulaire. Dans les tissus murins, l’expression de Cyp4x1 a été rapportée dans des contextes enrichis en cerveau, ce qui soutient les recherches sur les réseaux de signalisation lipidique pertinents pour la neuroinflammation et la régulation neurovasculaire. Une régulation altérée des enzymes P450 impliquées dans le métabolisme des lipides est fréquemment étudiée dans des modèles de troubles métaboliques et inflammatoires, faisant de Cyp4x1 un nœud utile pour des études mécanistiques axées sur des voies.

Les particules d'activation lentivirales CYP4X1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Cyp4x1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYP4X1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Cyp4x1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYP4X1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Cyp4x1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.