Partículas Lentivirales de Activación (m) Cyp4f15: sc-430669-LAC

Cyp4f15 codifica una monooxigenasa del citocromo P450 de ratón de la familia CYP4F que cataliza la ω-hidroxilación de ácidos grasos y mediadores lipídicos. Al regular el recambio de eicosanoides y lípidos de señalización relacionados, las enzimas CYP4F influyen en la señalización inflamatoria, el metabolismo oxidativo y las vías de homeostasis lipídica. Una actividad alterada de CYP4F puede modificar las concentraciones locales de lípidos bioactivos, vinculando este eje enzimático con estudios sobre regulación inmunitaria, metabolismo hepático e intestinal y respuestas tisulares al estrés. Por tanto, Cyp4f15 constituye un nodo útil para diseccionar redes de mediadores lipídicos y programas metabólicos sensibles a xenobióticos en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral Cyp4f15 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Cyp4f15 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Cyp4f15 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Cyp4f15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Cyp4f15. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Cyp4f15 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.