Plásmido CRISPR de Activación (m) Cyp4f15: sc-430669-ACT

Cyp4f15 codifica una monooxigenasa de la familia 4F del citocromo P450 en ratón que cataliza el metabolismo oxidativo de lípidos endógenos, incluida la hidroxilación de ácidos grasos y eicosanoides que modulan la señalización inflamatoria y la homeostasis lipídica. Como enzima asociada al retículo endoplásmico (RE), Cyp4f15 contribuye a redes de biotransformación de xenobióticos y lípidos que se entrecruzan con el equilibrio redox, la remodelación de lípidos de membrana y vías downstream de modulación inmunitaria. Una regulación alterada de la oxidación mediada por CYP4F puede influir en las respuestas tisulares al estrés metabólico y a señales inflamatorias, lo que convierte a Cyp4f15 en un nodo útil para estudiar el recambio de mediadores lipídicos en el hígado y en contextos relevantes para el sistema inmune. Estos procesos se exploran con frecuencia en modelos de desregulación metabólica y fenotipos relacionados con la inflamación, sin que ello implique resultados terapéuticos.

Cyp4f15 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cyp4f15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cyp4f15 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cyp4f15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cyp4f15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cyp4f15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cyp4f15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cyp4f15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cyp4f15 en células tumorales con expresión de Cyp4f15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.