Plásmido CRISPR de Activación (m) CYP4A10: sc-419927-ACT

El gen Cyp4a10 de ratón codifica la enzima del citocromo P450 CYP4A10, una ω-hidroxilasa microsomal de ácidos grasos que cataliza el metabolismo de ácidos grasos de cadena media y larga, incluido el ácido araquidónico, para generar eicosanoides bioactivos como el 20-HETE. A través de estas reacciones, CYP4A10 contribuye a la homeostasis lipídica y al equilibrio redox, y puede influir en redes de señalización vinculadas a la regulación del receptor activado por proliferadores de peroxisomas (PPAR), el transporte tubular renal y el tono vascular. La alteración de la expresión o actividad de Cyp4a10 se ha asociado con perfiles de eicosanoides desregulados y con efectos posteriores sobre el control de la presión arterial, la fisiología renal y las respuestas inflamatorias. Como resultado, este gen se estudia con frecuencia en modelos de estrés metabólico y en vías que conectan la oxidación de lípidos con fenotipos cardiorrenales.

CYP4A10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cyp4a10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP4A10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cyp4a10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cyp4a10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP4A10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cyp4a10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP4A10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP4A10 en células tumorales con expresión de Cyp4a10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.