Plasmide CRISPR d'Activation (m) CYP4A10: sc-419927-ACT

Le gène murin **Cyp4a10** code l’enzyme du cytochrome P450 **CYP4A10**, une ω‑hydroxylase microsomale des acides gras qui catalyse le métabolisme des acides gras à chaîne moyenne et longue, notamment la conversion de l’acide arachidonique en eicosanoïdes bioactifs tels que le **20‑HETE**. Par ces réactions, CYP4A10 contribue à l’homéostasie lipidique et à l’équilibre rédox, et peut influencer des réseaux de signalisation liés à la régulation des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (**PPAR**), au transport tubulaire rénal et au tonus vasculaire. Des modifications de l’expression ou de l’activité de **Cyp4a10** ont été associées à des profils d’eicosanoïdes perturbés et à des effets en aval sur le contrôle de la pression artérielle, la physiologie rénale et les réponses inflammatoires. Par conséquent, ce gène est fréquemment étudié dans des modèles de stress métabolique et dans les voies reliant l’oxydation des lipides à des phénotypes cardio‑rénaux.

CYP4A10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cyp4a10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP4A10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cyp4a10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cyp4a10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP4A10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cyp4a10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP4A10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP4A10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cyp4a10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.