Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP3A5: sc-401306-ACT

CYP3A5 codifica una monooxigenasa del citocromo P450 que contribuye al metabolismo oxidativo de esteroides endógenos y xenobióticos, modulando la exposición celular a compuestos bioactivos y a sus metabolitos. Como parte de la subfamilia CYP3A, CYP3A5 participa en la transferencia de electrones dependiente de NADPH a través de la reductasa del citocromo P450 e influye en la homeostasis lipídica, la señalización hormonal y las respuestas celulares al estrés mediante una regulación impulsada por metabolitos. Su expresión depende del tejido y del genotipo, con actividad destacada en hígado y riñón que contribuye a la variabilidad interindividual en la capacidad metabólica. La desregulación de la expresión o función de CYP3A5 se ha asociado con farmacocinética alterada y con una mayor susceptibilidad a alteraciones metabólicas y patología renal, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de vías de detoxificación.

CYP3A5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP3A5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP3A5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP3A5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP3A5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP3A5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP3A5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP3A5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP3A5 en células tumorales con expresión de CYP3A5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.