Plásmido Doble Nickase (h) CYP2J2: sc-402955-NIC

CYP2J2 codifica una epoxigenasa humana del citocromo P450 que oxida lípidos endógenos, incluida la conversión del ácido araquidónico en ácidos epoxieicosatrienoicos (EET), mediadores bioactivos que influyen en el tono vascular, la señalización inflamatoria y las respuestas celulares al estrés. A través de su actividad de monooxigenasa microsomal, CYP2J2 se integra en las vías del metabolismo de eicosanoides y de la homeostasis redox, que pueden modular la función endotelial y la biología del músculo liso. Se han estudiado cambios en la expresión o la actividad de CYP2J2 en relación con rasgos cardiometabólicos, estados inflamatorios y fenotipos de células tumorales, lo que refleja su papel en el equilibrio de mediadores lipídicos y la señalización celular. Como enzima metabolizadora de xenobióticos, CYP2J2 también contribuye a la biotransformación oxidativa de determinados compuestos, lo que la hace relevante para la investigación en farmacología y toxicología.

CYP2J2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP2J2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP2J2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP2J2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP2J2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.