Plasmide CRISPR d'Activation (m) CYP2E1: sc-419917-ACT

Le gène murin Cyp2e1 code l’enzyme du cytochrome P450 CYP2E1, une monooxygénase microsomale qui oxyde de petits substrats organiques, notamment l’éthanol, l’acétone et d’autres xénobiotiques de faible poids moléculaire. L’activité de CYP2E1 contribue au métabolisme de phase I et peut augmenter la production d’espèces réactives de l’oxygène (ERO), ce qui l’associe au stress oxydatif, à la peroxydation lipidique et aux réponses de stress du réticulum endoplasmique dans les hépatocytes. Dans le foie, CYP2E1 s’inscrit à l’interface de voies régissant l’élimination des xénobiotiques, l’homéostasie redox et la signalisation inflammatoire. Des modifications de l’expression ou de l’activité de Cyp2e1 sont fréquemment étudiées dans des modèles de lésions hépatiques induites par des toxiques, de dysfonction métabolique et de pathologies hépatiques associées à l’alcool, afin de comprendre comment l’activation métabolique et les ERO favorisent les dommages tissulaires.

CYP2E1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cyp2e1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP2E1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cyp2e1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cyp2e1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP2E1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cyp2e1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP2E1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP2E1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cyp2e1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.