Plásmido CRISPR de Activación (m) CYP2E1: sc-419917-ACT

El gen Cyp2e1 de ratón codifica la enzima del citocromo P450 CYP2E1, una monooxigenasa microsomal que oxida sustratos orgánicos pequeños, como etanol, acetona y otros xenobióticos de bajo peso molecular. La actividad de CYP2E1 contribuye al metabolismo de fase I y puede aumentar la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), lo que la vincula con el estrés oxidativo, la peroxidación lipídica y las respuestas de estrés del retículo endoplásmico en los hepatocitos. En el hígado, CYP2E1 se entrecruza con vías que regulan la eliminación de xenobióticos, la homeostasis redox y la señalización inflamatoria. La expresión o actividad alteradas de Cyp2e1 se estudian con frecuencia en modelos de daño hepático inducido por tóxicos, disfunción metabólica y patología hepática asociada al alcohol para comprender cómo la activación metabólica y las ROS impulsan el daño tisular.

CYP2E1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cyp2e1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP2E1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cyp2e1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cyp2e1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP2E1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cyp2e1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP2E1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP2E1 en células tumorales con expresión de Cyp2e1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.