Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP2C9: sc-403593-ACT

CYP2C9 codifica una importante monooxigenasa del citocromo P450 humano que cataliza el metabolismo oxidativo de diversos xenobióticos y lípidos endógenos, contribuyendo al aclaramiento hepático de fármacos y a las vías de bioactivación. La enzima funciona en el retículo endoplásmico como parte de la cadena de transferencia de electrones del P450 y se integra con la homeostasis redox, la señalización lipídica y las redes de desintoxicación. La variación interindividual en la expresión y la actividad de CYP2C9 es un determinante clave de la capacidad metabólica e influye en la susceptibilidad a reacciones adversas a fármacos y a interacciones fármaco–fármaco. La regulación alterada de CYP2C9 también se estudia en el contexto de la enfermedad hepática, la inflamación y las respuestas al estrés inducidas por xenobióticos que remodelan los programas génicos metabólicos.

CYP2C9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP2C9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP2C9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP2C9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP2C9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP2C9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP2C9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP2C9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP2C9 en células tumorales con expresión de CYP2C9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.