CYP2C9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403593-ACT

CYP2C9 kodiert eine wichtige humane Cytochrom-P450-Monooxygenase, die den oxidativen Metabolismus verschiedenster Xenobiotika und endogener Lipide katalysiert und damit zur hepatischen Arzneistoff-Clearance sowie zu Bioaktivierungswegen beiträgt. Das Enzym ist im endoplasmatischen Retikulum als Teil der P450-Elektronentransferkette aktiv und ist mit der Redox-Homöostase, der Lipidsignalgebung und Detoxifikationsnetzwerken verknüpft. Interindividuelle Unterschiede in Expression und Aktivität von CYP2C9 sind ein zentraler Faktor für die metabolische Kapazität und beeinflussen die Anfälligkeit für unerwünschte Arzneimittelwirkungen und Arzneimittelinteraktionen. Eine veränderte Regulation von CYP2C9 wird zudem im Zusammenhang mit Lebererkrankungen, Entzündungen und xenobiotikainduzierten Stressantworten untersucht, die metabolische Genprogramme umgestalten.

CYP2C9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP2C9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP2C9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP2C9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP2C9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP2C9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP2C9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP2C9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP2C9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP2C9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.