Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP2A: sc-403450-ACT

CYP2A13 codifica una monooxigenasa humana del citocromo P450 de la subfamilia CYP2A que cataliza el metabolismo oxidativo de diversos xenobióticos y sustratos endógenos. Como componente de la biotransformación de fase I, CYP2A13 participa en reacciones dependientes del estado redox que determinan la exposición celular a sustancias químicas inhaladas y sistémicas, influyendo en las vías posteriores de desintoxicación y de estrés oxidativo. Su expresión y actividad contribuyen a la variabilidad interindividual en la capacidad metabólica, por lo que es relevante para estudios de sensibilidad a sustancias químicas y de relaciones genotipo–fenotipo en biología de la exposición. Por ello, CYP2A13 se utiliza ampliamente como modelo para investigar cómo el metabolismo mediado por P450 se integra con la biología epitelial, la señalización inflamatoria y los mecanismos de bioactivación de carcinógenos en sistemas humanos.

CYP2A13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP2A13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP2A13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP2A13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP2A13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP2A13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP2A13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP2A13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP2A13 en células tumorales con expresión de CYP2A13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.