CYP11B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419894

Übersicht

Cyp11b2 kodiert für CYP11B2 (Aldosteronsynthase), ein mitochondriales Cytochrom-P450-Enzym, das die letzten Schritte der Aldosteronbiosynthese aus Desoxycorticosteron katalysiert. Diese Aktivität ist Teil des steroidogenen Signalwegs und koppelt den Elektronentransfer von Adrenodoxin/Adrenodoxin-Reduktase an oxidative Reaktionen, die die Mineralokortikoidproduktion und die nachgelagerte Elektrolyt- und Flüssigkeitshomöostase regulieren. In Zellen der Zona glomerulosa der Mausnebennieren integriert CYP11B2 hormonelle Signale, darunter calciumabhängige und auf Angiotensin II ansprechende Programme, um die Steroidproduktion feinzujustieren. Eine dysregulierte Cyp11b2-Expression oder ein Aldosteronüberschuss ist mit maladaptiven kardiovaskulären und renalen physiologischen Veränderungen verbunden, wodurch das Gen für mechanistische Studien zur endokrinen Kontrolle und stressresponsiven metabolischen Umprogrammierung relevant ist.

Das CYP11B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cyp11b2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cyp11b2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cyp11b2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYP11B2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cyp11b2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYP11B2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cyp11b2-Exone abzielen, die für die CYP11B2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cyp11b2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CYP11B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CYP11B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cyp11b2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYP11B2 HDR-Plasmid (m) und CYP11B2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cyp11b2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cyp11b2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.