Plásmido Doble Nickase (h) Cyclophilin F: sc-402902-NIC

PPIF codifica la ciclofilina F, una isomerasa peptidil‑prolil cis‑trans mitocondrial que favorece el plegamiento de proteínas y la proteostasis dentro del entorno de la matriz y la membrana interna. La ciclofilina F contribuye a la regulación de la transición de permeabilidad mitocondrial y de las respuestas al estrés oxidativo, lo que la vincula con el control del potencial de membrana mitocondrial, el manejo de especies reactivas de oxígeno y la señalización relacionada con la apoptosis. A través de estos procesos, PPIF se cruza con el metabolismo energético y las vías de supervivencia celular, que con frecuencia se ven alteradas en la neurodegeneración, en modelos de lesión por isquemia‑reperfusión y en la remodelación mitocondrial asociada al cáncer. Por ello, la actividad alterada de PPIF se ha utilizado para investigar cómo el estrés mitocondrial se integra con programas inflamatorios y de muerte celular en sistemas celulares humanos.

Cyclophilin F El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPIF en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPIF. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPIF. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPIF alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.