Plasmide Double Nickase (h) cyclin T1: sc-400623-NIC

CCNT1 code la cycline T1, une sous-unité régulatrice du complexe P-TEFb qui s’associe à CDK9 pour phosphoryler le domaine C-terminal de l’ARN polymérase II et favoriser l’élongation transcriptionnelle. En contrôlant la levée de la pause, la cycline T1 influence des programmes d’expression génique sensibles aux stimuli, la progression du cycle cellulaire et des réseaux transcriptionnels associés à la différenciation. L’activité de P-TEFb dépendante de CCNT1 s’interface aussi avec la régulation de la chromatine et le traitement des ARN, reliant la dynamique de la transcription à des circuits plus larges de régulation génique. Une signalisation cycline T1/CDK9 dérégulée a été impliquée dans des états transcriptionnels oncogéniques et d’autres troubles caractérisés par un contrôle transcriptionnel altéré, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de phénotypes dépendants de la transcription.

cyclin T1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCNT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCNT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCNT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCNT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.