Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
cyclin T1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400623
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- cyclin T1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico cyclin T1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cyclin T1 Anticuerpo (E-3): sc-271348
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
cyclin T1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400623 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CCNT1 codifica la ciclina T1, una subunidad reguladora del complejo P-TEFb que se asocia con CDK9 para fosforilar la ARN polimerasa II y promover la elongación transcripcional. Mediante el control de la pausa proximal al promotor, la ciclina T1 influye en programas de expresión vinculados a la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la diferenciación. La actividad de CCNT1 se relaciona con el procesamiento de ARN acoplado a la transcripción y con la regulación asociada a la cromatina, modelando la dinámica global de la expresión génica. La desregulación de la señalización de P-TEFb y del control transcripcional dependiente de la ciclina T1 se ha implicado en contextos que incluyen programas transcripcionales oncogénicos e interacciones huésped–patógeno relevantes para la transcripción viral.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO cyclin T1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCNT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCNT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCNT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cyclin T1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCNT1 para la investigación de la señalización de cyclin T1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CCNT1 críticos para la función de cyclin T1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCNT1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido cyclin T1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cyclin T1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCNT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cyclin T1 (h) y el plásmido HDR cyclin T1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCNT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCNT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.