Plásmido CRISPR de Activación (h) cyclin G1: sc-402045-ACT

CCNG1 codifica la ciclina G1, una ciclina atípica que integra la señalización de estrés con el control del ciclo celular y la regulación transcripcional. La ciclina G1 está estrechamente vinculada a las respuestas de daño en el ADN dependientes de p53, modulando el comportamiento de los puntos de control e influyendo en la proliferación, la apoptosis y la homeostasis celular mediante interacciones con complejos de fosfatasas y circuitos reguladores asociados a la ubiquitina. Se ha informado de una expresión alterada de CCNG1 en múltiples contextos tumorales y con frecuencia se estudia como un nodo que conecta el estrés genotóxico, el control del crecimiento y la remodelación de vías oncogénicas. Como regulador humano del ciclo celular sensible a señales ambientales e intracelulares, la ciclina G1 ofrece una diana manejable para analizar la intercomunicación entre vías de reparación del ADN, señalización de checkpoints y programas transcripcionales adaptativos.

cyclin G1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCNG1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cyclin G1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCNG1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCNG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cyclin G1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCNG1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cyclin G1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cyclin G1 en células tumorales con expresión de CCNG1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.