Plásmido CRISPR de Activación (h) cyclin F: sc-401505-ACT

El gen humano **CCNF** codifica la **ciclina F**, una proteína con dominio F-box que actúa como el componente de reconocimiento de sustratos del complejo ligasa E3 de ubiquitina **SCF(ciclina F)** y vincula la progresión del ciclo celular con la proteostasis. La ciclina F regula la degradación dependiente de ubiquitina de factores clave que controlan el licenciamiento de la replicación del ADN, la biología del centrosoma y la integridad del genoma, coordinando así los eventos de transición S/G2 y suprimiendo el estrés replicativo. A través de estas funciones, **CCNF** se integra con vías que gobiernan las respuestas al daño del ADN, la señalización por ubiquitina y el control de los puntos de control del ciclo celular. La desregulación de la ubiquitinación de sustratos mediada por ciclina F se ha asociado con alteraciones en el mantenimiento del genoma y se ha estudiado en el contexto de trastornos proliferativos y neurodegeneración.

cyclin F El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCNF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cyclin F El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCNF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCNF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cyclin F. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCNF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cyclin F en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cyclin F en células tumorales con expresión de CCNF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.