CUL-4A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401967

Descripción general

CUL4A codifica la cullina-4A, un andamiaje central del complejo ligasa de ubiquitina E3 CRL4, que coordina la ubiquitinación y la degradación proteasomal de proteínas que regulan la replicación del ADN, la dinámica de la cromatina y la progresión del ciclo celular. Al asociarse con proteínas adaptadoras como DDB1 y con múltiples receptores de sustrato DCAF, CUL-4A regula procesos como la reparación por escisión de nucleótidos, el licenciamiento de la replicación y las respuestas al daño del ADN inducido por radiación UV. La alteración de la proteostasis dependiente de CUL4A puede perturbar la estabilidad del genoma y el control de los puntos de control, vinculando una actividad CRL4 modificada con fenotipos asociados al cáncer y otros trastornos que implican una reparación defectuosa del ADN. Como nodo central en la señalización mediada por ubiquitina, CUL-4A se estudia con frecuencia en vías que acoplan la regulación de la cromatina con el estrés replicativo y el control transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CUL4A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CUL4A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CUL4A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CUL-4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CUL4A para la investigación de la señalización de CUL-4A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CUL4A críticos para la función de CUL-4A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CUL4A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CUL-4A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CUL-4A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CUL4A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CUL-4A (h) y el plásmido HDR CUL-4A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CUL4A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CUL4A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.