Plásmido Doble Nickase (h) CUL-2: sc-402370-NIC

El gen humano **CUL2** codifica la cullina-2 (CUL-2), un andamiaje central de los complejos de ligasa de ubiquitina E3 **CUL2-RING**, que acoplan módulos de reconocimiento de sustratos como **VHL** o proteínas con **caja SOCS** a la transferencia de ubiquitina mediada por **RBX1**. Estos complejos regulan la proteostasis al dirigir proteínas específicas hacia la ubiquitinación y su degradación por el proteasoma, modulando vías que incluyen la detección de oxígeno y la señalización del **factor inducible por hipoxia (HIF)**, la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN. A través de su función en el recambio dependiente de VHL de **HIF-α** y otros sustratos, CUL-2 ayuda a coordinar la adaptación celular a la disponibilidad de oxígeno y al estado metabólico. La desregulación de las redes de ubiquitinación dependientes de CUL2 se ha relacionado con señalización oncogénica, respuestas alteradas a la hipoxia y defectos de estabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer.

CUL-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CUL2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CUL2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CUL2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CUL2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.