Plasmide CRISPR/Cas9 KO CTRL (h): sc-410749

Présentation

CTRL (de type chymotrypsine) code une protéase à sérine qui participe à la dégradation protéolytique des protéines alimentaires et contribue plus largement au réseau des enzymes digestives. En tant que membre de la famille des peptidases de type trypsine, l’activité de CTRL s’inscrit dans la protéolyse extracellulaire et peut être envisagée dans le cadre de voies régissant l’activation des protéases, le renouvellement des substrats et la régulation par des inhibiteurs endogènes de protéases. Les variations d’expression ou d’activité des protéases digestives sont fréquemment étudiées en biologie pancréatique et gastro-intestinale, notamment les mécanismes qui influencent la sécrétion enzymatique, l’activation des zymogènes et la protéostasie muqueuse. Ces éléments font de CTRL un nœud moléculaire pertinent pour examiner comment des microenvironnements dépendants des protéases modulent la signalisation cellulaire et la physiologie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CTRL (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CTRL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CTRL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CTRL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CTRL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CTRL pour l'étude de la signalisation de CTRL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CTRL essentiels à la fonction de CTRL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CTRL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CTRL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CTRL plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CTRL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CTRL plasmide HDR (h) et le CTRL (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CTRL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CTRL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.