CTP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419996

Panoramica

Slc25a1 codifica il trasportatore mitocondriale del citrato CTP, un carrier della membrana interna che esporta citrato/isocitrato nel citosol in scambio con malato. Questo flusso collega il ciclo dell’acido tricarbossilico alla produzione citosolica di acetil‑CoA, sostenendo la lipogenesi de novo, la biosintesi del colesterolo e la regolazione dell’espressione genica dipendente dall’acetilazione, influenzando al contempo l’equilibrio redox tramite vie che generano NADPH. Coordinando il trasferimento di carbonio tra mitocondrio e citosol, CTP contribuisce all’adattamento metabolico durante proliferazione e differenziamento e può modulare programmi infiammatori e di risposta allo stress. Un trasporto del citrato disregolato è stato associato a errori congeniti del metabolismo e a fenotipi metabolici più ampi, rendendo Slc25a1 un bersaglio rilevante per lo studio del metabolismo mitocondriale e dell’omeostasi lipidica in sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CTP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc25a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc25a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc25a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CTP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc25a1 per lo studio della segnalazione di CTP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc25a1 critici per la funzione di CTP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc25a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CTP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CTP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc25a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CTP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CTP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc25a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc25a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.