Plásmido CRISPR de Activación (h) CTGF: sc-400091-ACT

El factor de crecimiento del tejido conectivo (CTGF/CCN2) es una proteína matricelular secretada que integra la remodelación de la matriz extracelular con la señalización de factores de crecimiento para regular la adhesión celular, la migración, la proliferación y programas génicos fibrogénicos. El CTGF es inducible por TGF-β y por señales mecánicas, y modula vías que incluyen la señalización SMAD, la adhesión mediada por integrinas y la comunicación cruzada con MAPK y la mecanotransducción YAP/TAZ. A través de estas funciones, el CTGF modela la reparación tisular y la remodelación del estroma al influir en la deposición de colágeno, la activación de miofibroblastos y las respuestas angiogénicas. La expresión desregulada de CTGF se asocia con fibrosis patológica y la progresión del estroma asociado a tumores, lo que lo convierte en una lectura molecular ampliamente utilizada y en un impulsor en estudios de biología de la matriz extracelular.

CTGF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTGF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CTGF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTGF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTGF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CTGF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTGF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CTGF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CTGF en células tumorales con expresión de CTGF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.