Partículas Lentivirales de Activación (m2) CTDSPL2: sc-435953-LAC-2

El gen murino Ctdspl2 codifica CTDSPL2, una fosfatasa nuclear de la familia haloácido deshalogenasa (HAD) implicada en la regulación de la transcripción mediante la desfosforilación de residuos de serina en el dominio C-terminal de la ARN polimerasa II, influyendo así en programas de expresión génica vinculados al control del ciclo celular y la diferenciación. CTDSPL2 se sitúa dentro de redes de señalización mediadas por fosfatasas que coordinan procesos asociados a la cromatina, el procesamiento de ARN y las salidas de vías de desarrollo en células de mamífero. La desregulación de la actividad de fosfatasas dirigidas al CTD es ampliamente relevante en modelos de estrés proliferativo y de compromiso de linaje alterado, lo que convierte a Ctdspl2 en una diana útil para estudiar mecanismos de control transcripcional dependientes de fosforilación. La edición génica de Ctdspl2 en sistemas de ratón permite la interrogación funcional de la actividad de fosfatasas nucleares, el mapeo de consecuencias transcripcionales aguas abajo mediante ensayos basados en RNA-seq/ChIP y el análisis de interacciones entre vías en líneas celulares modificadas o en modelos genéticos in vivo.

Las partículas de activación lentiviral CTDSPL2 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ctdspl2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CTDSPL2 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ctdspl2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CTDSPL2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ctdspl2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.