Plásmido CRISPR de Activación (h) CTCF: sc-401245-ACT

CTCF (factor de unión a CCCTC) es una proteína de unión al ADN con dedos de zinc que actúa como un regulador maestro de la arquitectura de la cromatina, coordinando la comunicación entre potenciadores y promotores, el aislamiento transcripcional y el establecimiento de bucles genómicos de largo alcance. Al moldear los dominios topológicamente asociados y regular elementos de frontera, CTCF influye en procesos clave como los programas de expresión génica, el momento de replicación y las respuestas al daño del ADN. La alteración de la organización del genoma dependiente de CTCF se asocia con una desregulación transcripcional generalizada e inestabilidad genómica, características que se estudian con frecuencia en el contexto de trastornos del desarrollo y la remodelación de la cromatina asociada al cáncer. Como organizador central de la estructura 3D del genoma, CTCF se utiliza ampliamente en estudios mecanísticos de regulación epigenética, especificación de linaje y control promotor–potenciador.

CTCF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTCF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CTCF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTCF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTCF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CTCF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTCF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CTCF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CTCF en células tumorales con expresión de CTCF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.