Plásmido CRISPR de Activación (h2) CtBP2: sc-401865-ACT-2

El CTBP2 humano codifica la proteína de unión al extremo C 2 (CtBP2), un correpsor transcripcional sensible al NADH que modula la expresión génica al asociarse con factores que se unen al ADN y reclutar complejos modificadores de la cromatina. CtBP2 regula programas vinculados con la determinación del destino celular, la transición epitelio-mesénquima, el control del ciclo celular y la apoptosis, integrando el estado metabólico con las salidas transcripcionales a lo largo de vías del desarrollo y de respuesta al estrés. La actividad desregulada de CTBP2 se ha asociado con redes transcripcionales oncogénicas alteradas y una diferenciación aberrante en múltiples contextos de cáncer, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la progresión tumoral y la metástasis. La edición génica de CTBP2 permite la interrogación funcional de la regulación de la cromatina dependiente de correpresores, el mapeo de circuitos transcripcionales y la validación de dependencias de vías mediante ensayos con reporteros, lecturas ómicas y cribados de perturbación.

CtBP2 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTBP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CtBP2 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTBP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTBP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CtBP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTBP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CtBP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CtBP2 en células tumorales con expresión de CTBP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.