CtBP2 CRISPR Activation Plasmid (h2): sc-401865-ACT-2

Das humane Gen CTBP2 kodiert das C‑terminale Bindungsprotein 2 (CtBP2), einen NADH-sensitiven transkriptionellen Korepressor, der die Genexpression moduliert, indem er mit DNA-bindenden Faktoren zusammenwirkt und chromatinmodifizierende Komplexe rekrutiert. CtBP2 steuert Programme, die mit Zellschicksalsentscheidungen, epithelial-mesenchymaler Transition, Zellzykluskontrolle und Apoptose verknüpft sind, und verknüpft dabei den metabolischen Zustand mit transkriptionellen Outputs über Entwicklungs- und stressantwortende Signalwege hinweg. Eine dysregulierte CTBP2-Aktivität wurde in mehreren Krebs-Kontexten mit veränderten onkogenen transkriptionellen Netzwerken und aberranter Differenzierung in Verbindung gebracht, was CTBP2 für mechanistische Studien zur Tumorprogression und Metastasierung relevant macht. Das Gene Editing von CTBP2 ermöglicht die funktionelle Untersuchung korepressorabhängiger Chromatinregulation, die Kartierung transkriptioneller Schaltkreise und die Validierung von Signalwegabhängigkeiten mithilfe von Reporter-Assays, Omics-Auslesen und Perturbations-Screens.

CtBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTBP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CtBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTBP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTBP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CtBP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTBP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CtBP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CtBP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTBP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.