CtBP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400667-ACT

CTBP1 kodiert das C‑terminale Bindungsprotein 1 (CtBP1), einen NADH-sensitiven transkriptionellen Koregulator, der den metabolischen Zustand mit Genexpressionsprogrammen verknüpft. CtBP1 bildet Komplexe mit sequenzspezifischen DNA-bindenden Faktoren und Chromatinmodifikatoren, um transkriptionelle Repression und Aktivierung zu steuern, und beeinflusst dabei die epithelial–mesenchymale Transition, die Zellzyklusprogression, Apoptose und Differenzierung. Es ist an Chromatin-Remodeling- und Transkriptionskontrollwegen beteiligt, indem es Histondeacetylasen und andere epigenetische Regulatoren rekrutiert und so zelluläre Identität und Stressantworten prägt. Eine fehlregulierte CTBP1-Aktivität wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit onkogenen Transkriptionsnetzwerken und veränderten Zellschicksalsentscheidungen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Transkription und Epigenetik unterstützt.

CtBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTBP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CtBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTBP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTBP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CtBP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTBP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CtBP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CtBP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTBP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.