Plásmido CRISPR de Activación (h) CST: sc-404388-ACT

SLC35A1 codifica el transportador de ácido siálico CMP (CST), un transportador de azúcares nucleótido residente en el Golgi que importa CMP–ácido N-acetilneuramínico desde el citosol hacia la luz del Golgi para sostener la sialilación terminal de glicoproteínas y glicolípidos. Al regular la disponibilidad de ácido siálico activado para las sialiltransferasas, el CST influye en el tráfico de proteínas, la estabilidad de receptores, el reconocimiento célula–célula y fenotipos de interacción inmunitaria mediante el control global de la glicosilación. La actividad alterada de SLC35A1 puede remodelar los patrones de sialilación en la superficie celular que afectan la señalización, la adhesión y las interacciones con patógenos, lo que lo hace relevante para estudios de trastornos de la glicosilación y de mecanismos que vinculan la remodelación de glicanos con el estrés celular y fenotipos asociados a enfermedad.

CST El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC35A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CST El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC35A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC35A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CST. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC35A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CST en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CST en células tumorales con expresión de SLC35A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.