Csk Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419846

Descripción general

Csk (quinasa Src C-terminal) es una tirosina quinasa citosólica que fosforila la tirosina reguladora del extremo C-terminal de las quinasas de la familia Src, imponiendo una conformación autoinhibida y limitando la señalización aguas abajo. Al modular las vías dependientes de Src, Csk influye en la señalización proximal a receptores, la dinámica de las adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y los umbrales de señalización de receptores inmunitarios en múltiples tipos celulares. En modelos murinos, la alteración de la actividad de Csk perturba la activación y la tolerancia de los linfocitos, y afecta procesos vinculados a la inflamación y a la señalización oncogénica mediante la activación aberrante de quinasas Src. En consecuencia, Csk se estudia ampliamente como un regulador negativo central que conecta la señalización de factores de crecimiento e inmunitaria con programas de adhesión, migración y proliferación celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Csk (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Csk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Csk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Csk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Csk.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Csk para la investigación de la señalización de Csk, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Csk críticos para la función de Csk
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Csk para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Csk CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Csk CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Csk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Csk (m) y el plásmido HDR Csk (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Csk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Csk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.