cryptdin 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419984

Panoramica

Defa3 codifica la criptidina 3, una α-defensina derivata dalle cellule di Paneth che contribuisce alla difesa immunitaria innata nell’intestino tenue del topo colpendo direttamente le membrane microbiche e modulando la composizione del microbiota intestinale. Come componente della biologia dei peptidi antimicrobici, la criptidina 3 partecipa al mantenimento della barriera epiteliale e all’omeostasi immunitaria mucosale insieme alle vie di riconoscimento dei patogeni e di segnalazione infiammatoria. Alterazioni nella produzione di defensine da parte delle cellule di Paneth sono state associate a disbiosi e infiammazione intestinale, rendendo Defa3 rilevante per studi meccanicistici delle interazioni ospite–microbo. La perturbazione di Defa3 è utile anche per esaminare come i peptidi antimicrobici influenzino la resistenza alla colonizzazione batterica e le risposte dell’epitelio allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cryptdin 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Defa3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Defa3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Defa3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cryptdin 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Defa3 per lo studio della segnalazione di cryptdin 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Defa3 critici per la funzione di cryptdin 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Defa3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cryptdin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal cryptdin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Defa3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cryptdin 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR cryptdin 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Defa3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Defa3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.