cryptdin 25 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419983

Descripción general

Defa25 codifica la criptidina 25, una α-defensina derivada de las células de Paneth del ratón que contribuye a la inmunidad innata en las superficies mucosas al ejercer una amplia actividad antimicrobiana en la luz intestinal. Como péptido catiónico secretado, la criptidina 25 ayuda a modular las interacciones entre el huésped y la microbiota y respalda la homeostasis de la barrera epitelial, vinculando las funciones efectoras antimicrobianas con la señalización inflamatoria y las vías de detección microbiana. La expresión alterada de defensinas y la disfunción de las células de Paneth se estudian con frecuencia en el contexto de la disbiosis intestinal y de estados inflamatorios crónicos, donde los cambios en los perfiles de péptidos antimicrobianos pueden influir en la susceptibilidad a infecciones entéricas y en la inflamación de la mucosa. Por lo tanto, Defa25 es relevante para estudios mecanísticos de la inmunidad intestinal, la comunicación epitelio–microbio y los programas secretores específicos de linaje dentro de la cripta intestinal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cryptdin 25 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Defa25 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Defa25 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Defa25 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cryptdin 25.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Defa25 para la investigación de la señalización de cryptdin 25, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Defa25 críticos para la función de cryptdin 25
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Defa25 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cryptdin 25 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido cryptdin 25 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Defa25. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cryptdin 25 (m) y el plásmido HDR cryptdin 25 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Defa25 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Defa25 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.