Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase Plasmid (h): sc-400270-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NLRP3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cryopyrin/NALP3/NLRP3: sc-134306
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400270-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400270-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes NLRP3 (Cryopyrin/NALP3) ist ein zytosolischer Mustererkennungsrezeptor, der als Reaktionszentrum für die Bildung des NLRP3-Inflammasoms dient, ausgelöst durch vielfältige pathogen- und gefahrassoziierte Signale, darunter Ionenflüsse, mitochondrialer Stress und lysosomale Schädigung. Nach Aktivierung assembliert NLRP3 mit ASC und Pro-Caspase-1, wodurch die Aktivierung von Caspase-1 vorangetrieben wird; dies fördert die Reifung von IL-1β und IL-18 und löst eine gasdermin-D‑abhängige Pyroptose aus. Diese Signalachse ist zentral für die Regulation der angeborenen Immunantwort und verknüpft metabolischen sowie inflammatorischen Stress mit nachgeschalteten Zytokinprogrammen. Eine fehlregulierte NLRP3-Aktivität und entsprechende Varianten sind mit autoinflammatorischen Syndromen assoziiert und tragen zu Entzündungsmechanismen bei, die u. a. in Modellen für Gicht, Atherosklerose, Neuroinflammation und Stoffwechselerkrankungen untersucht werden.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NLRP3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NLRP3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NLRP3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NLRP3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.