Plásmido CRISPR de Activación (m) Cryopyrin/NALP3/NLRP3: sc-432122-ACT

El gen murino **Nlrp3** codifica la criopirina (NALP3/NLRP3), un receptor citosólico de reconocimiento de patrones que nuclea el inflamasoma NLRP3 en respuesta a diversas señales de peligro, como el flujo iónico, el estrés mitocondrial y el daño lisosomal. El ensamblaje del inflamasoma promueve la activación de la caspasa-1 dependiente de ASC, lo que conduce a la maduración y liberación de IL-1β e IL-18 y a la inducción de muerte celular piroptótica. La señalización de NLRP3 integra la detección inmunitaria innata con el cebado mediado por NF-κB y con redes de citocinas posteriores que moldean la activación mieloide, la inflamación tisular y la defensa del hospedador. La actividad desregulada de NLRP3 se utiliza ampliamente como eje mecanístico para modelar fenotipos autoinflamatorios y las contribuciones inflamatorias a procesos de enfermedad metabólica, neuroinflamatoria y cardiovascular en ratones.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nlrp3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nlrp3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nlrp3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cryopyrin/NALP3/NLRP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nlrp3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cryopyrin/NALP3/NLRP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cryopyrin/NALP3/NLRP3 en células tumorales con expresión de Nlrp3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.