Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400270-ACT

NLRP3 (criopirina/NALP3) é um receptor citosólico de reconhecimento de padrões que nucleia o inflamassoma NLRP3 em resposta a diversos sinais de estresse celular, incluindo fluxo iônico, disfunção mitocondrial, dano lisossomal e espécies reativas de oxigênio. A montagem do inflamassoma promove o recrutamento de ASC e a ativação da caspase-1, impulsionando o processamento e a secreção de IL-1β e IL-18 e possibilitando a piroptose dependente de gasdermina D. Esse eixo integra a sinalização imune inata com vias metabólicas e de detecção de perigo, moldando a ativação de leucócitos, a inflamação tecidual e a defesa do hospedeiro. A atividade desregulada de NLRP3 está implicada em mecanismos de doenças autoinflamatórias e inflamatórias, tornando-o um alvo-chave para o estudo da regulação do inflamassoma, da maturação de citocinas e de programas de morte celular em sistemas humanos.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NLRP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NLRP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NLRP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cryopyrin/NALP3/NLRP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NLRP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cryopyrin/NALP3/NLRP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cryopyrin/NALP3/NLRP3 em células tumorais com expressão de NLRP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.