Plasmide Double Nickase (h) CRX: sc-401736-NIC

CRX (cone-rod homeobox) code un facteur de transcription à homéodomaine spécifique de la rétine, indispensable à la différenciation et au maintien des photorécepteurs. Dans le noyau, CRX coordonne des programmes de régulation génique contrôlant les composants de la phototransduction, la biogenèse du segment externe et la maturation synaptique, en se liant à des éléments cis-régulateurs et en coopérant avec d’autres facteurs de transcription rétiniens. Il module des réseaux transcriptionnels liés à la signalisation du cGMP, à l’expression des opsines et au soutien métabolique nécessaires au fonctionnement des cônes et des bâtonnets. Une activité ou une expression altérée de CRX est associée à des phénotypes de dégénérescence rétinienne héréditaire, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques du développement des photorécepteurs et de la régulation génique impliquée dans la maladie.

CRX Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.