Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRP1 (h): sc-406188

Présentation

CSRP1 code la protéine 1 riche en cystéine et en glycine (CRP1), un facteur de liaison à l’actine contenant un domaine LIM, qui module l’organisation du cytosquelette ainsi que des programmes transcriptionnels liés à la forme et à la motilité cellulaires. CRP1 participe à la dynamique des fibres de stress d’actine et à la signalisation associée aux adhésions focales, contribuant à coordonner la différenciation des cellules musculaires lisses et, plus largement, le comportement des cellules mésenchymateuses. En influençant les voies dépendantes de l’adhésion et les réseaux de régulation génique, CSRP1 est fréquemment étudié dans des contextes de remodelage tissulaire et d’invasion cellulaire. Une expression altérée de CSRP1 a été rapportée dans de multiples cadres pathologiques, notamment des cancers et des maladies fibrosantes, où les changements du contrôle du cytosquelette et de l’état de différenciation constituent des axes expérimentaux centraux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CSRP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CSRP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CSRP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CSRP1 pour l'étude de la signalisation de CRP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CSRP1 essentiels à la fonction de CRP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CSRP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CRP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CSRP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRP1 plasmide HDR (h) et le CRP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CSRP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CSRP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.