CRP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401767-ACT

C‑reaktives Protein (CRP) ist ein sezerniertes Pentraxin, das im Rahmen der Akut‑Phase‑Antwort vor allem von Hepatozyten produziert wird, und es fungiert als lösliches Mustererkennungs­molekül, das an Phosphocholin auf mikrobiellen Oberflächen und an geschädigten Zellen bindet. Durch die Bindung an Fcγ‑Rezeptoren und die Aktivierung der klassischen Komplementkaskade über C1q verknüpft CRP die angeborene Immunerkennung mit Opsonierung, Phagozytose und der Verstärkung entzündlicher Prozesse. Die CRP‑Expression wird auf transkriptioneller Ebene durch proinflammatorische Zytokine induziert, insbesondere durch IL‑6 mit Beiträgen von IL‑1β und TNF, wobei JAK/STAT‑ und NF‑κB‑getriebene Signalprogramme integriert werden. Dysregulierte CRP‑Spiegel werden широко als Biomarker systemischer Entzündung genutzt und stehen in Zusammenhang mit kardiometabolischen Erkrankungen, Infektionen und autoimmuner Pathophysiologie, was mechanistische Studien zur Regulation von Entzündungen unterstützt.

CRP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CRP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CRP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CRP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CRP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CRP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CRP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CRP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CRP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CRP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.